PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

Osteosarcoma is a malignant tumor of primitive bone cells with a high incidence in dogs and humans. The need for more effective drugs with less adverse consequences has pushed the development of chemotherapeutic agents from plants and other natural sources. The aim of this study was to verify the cytotoxic effects of β-lapachone, a compound present in the sawdust of Tabebuia sp. (popularly known as ipê) wood, on canine osteosarcoma cells subcultured and treated in different concentrations (0.1μm, 0.3μm e 1.0μm) and exposure times (24h, 48h e 72h). Results were obtained through Trypan blue dye exclusion, tetrazolium reducing method, cell survival assay, Annexin V-FITC and Propidium Iodine labeling, JC-1 dye labeling and cell cycle kinetics e analysis. The group treated with 0.3μm β-lapachone presented higher decrease in cell viability (80.27%, 24h, 47.41%, 48h and 35.19%, 72h) and greater progression of cytotoxicity (19.73%, 24h, 52.59%, 48h and 64.81%, 72h). The lower IC50 (0.180μm) was verified in the group treated for 72 hours. Cell growth after treatment decreased as concentration and time of exposure increased, with 0.50% survival fraction at the concentration of 1.0μm. Initial apoptosis was the most frequent type of cell death in all groups, reaching bottom in the 24-hour group treated with 0.1μm (4.26%) and peaking in the 72-hour group treated with 1.0μm (85.89%). Mitochondrial depolarization demonstrated a dose-dependent phenomenon, indicating the intrinsic apoptosis. Cell growth inhibition by blocking cell cycle in the G0/G1 phase related to the exposure the time. β-lapachone is cytotoxic for canine osteosarcoma cells, induces apoptosis and promotes cell cycle arrest in G0/G1 phase.

• β Lapachone cell cycle induces apoptosis canine osteosarcoma lapachol lineage D-17 ipê naphthoquinone Tabebuia sp. pathology

Abstract in Portuguese:

O osteossarcoma é o tumor maligno das células ósseas primitivas, com alta incidência em cães e humanos. A necessidade de medicamentos mais efetivos, com menor consequência adversa, tem gerado esforços para o desenvolvimento de agentes quimioterápicos compostos por plantas e outras fontes naturais. O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos citotóxicos da β lapachona, um composto presente na serragem da madeira do ipê, sobre células de osteossarcoma canino subcultivadas e submetidas ao tratamento, de acordo com as diferentes concentrações (0,1μm; 0,3μm e 1,0μm) e tempo de exposição (24h, 48h e 72h). Os resultados foram obtidos por meio dos métodos de exclusão do corante azul de Tripan e de redução do tetrazólio, além dos ensaios de sobrevivência celular, de dupla marcação com Anexina V-FITC e Iodeto de Propídio, de marcação com o corante JC-1 e pela análise da cinética do ciclo celular. O grupo tratado com 0,3μm de β lapachona apresentou melhor regressão da viabilidade celular (80,27%, 24h; 47,41%, 48h e 35,19%, 72h) e maior progressão da citotoxicidade (19,73%, 24h; 52,59%, 48h e 64,81%, 72h). O menor IC50 (0,180μm) ocorreu no grupo tratado por 72 horas. O crescimento celular após o tratamento foi menor, de acordo com o aumento da concentração e tempo de exposição, apresentando 0,50% de fração de sobrevivência na concentração de 1,0μm. A apoptose inicial foi o tipo de morte celular mais frequente em todos os grupos, menor no grupo de 24 horas tratado com 0,1μm (4,26%) e maior no grupo de 72 horas tratado com 1,0μm (85,89%). A despolarização mitocondrial ocorreu de maneira dose dependente, indicando a ocorrência de apoptose intrínseca. A β lapachona possui efeitos citotóxicos em células de osteossarcoma canino, induz apoptose e promove o bloqueio do ciclo celular na fase G0/G1.

• β Lapachona ciclo celular apoptose em células osteossarcoma canino lapachol linhagem D-17 ipê naftoquinona Tabebuia sp. patologia

Abstract in English:

ABSTRACT.- Teixeira L.V., Lopes S.T.A., Martins D.B., França R.T. & Fighera R.A. 2010. [Fine-needle aspiration cytology as a sampling method for histopathology in canine osteosarcoma.] Punção aspirativa por agulha fina como método de coleta de material para a histopatologia no osteossarcoma canino. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(2):145-148. Laboratório de Análises Clínicas Veterinárias, Departamento de Clínica de Pequenos Animais, Hospital Veterinário Universitário, Universidade Federal de Santa Maria, 97105-900 Santa Maria, RS, Brazil. E-mail: luciele.sm@gmail.com Cytopathologic and histopathologic tests are important to obtain a definitive diagnosis of osteosarcoma. The sample for cytopathological exam is collected through fine-needle aspiration cytology (FNA). On the other hand, histopathological exams need a larger sample that is usually obtained by incisional biopsy. The objective of this article is to develop a FNA technique to biopsy and evaluate histopatologically samples of dogs with suspected osteosarcoma. Two FNS samples were collected from 12 such dogs. Samples obtained in the first procedure were examined cytologically. The material sampled at the second biopsy was fixed in 10% formalin and submitted to histopathological analysis. Four out of the 12 samples (33.3%) examined by the herein proposed method were diagnosed as osteosarcoma. These results indicate a possible adaptation of FNA for histopathological examination.

• Osteossarcoma citopatologia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Teixeira L.V., Lopes S.T.A., Martins D.B., França R.T. & Fighera R.A. 2010. [Fine-needle aspiration cytology as a sampling method for histopathology in canine osteosarcoma.] Punção aspirativa por agulha fina como método de coleta de material para a histopatologia no osteossarcoma canino. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(2):145-148. Laboratório de Análises Clínicas Veterinárias, Departamento de Clínica de Pequenos Animais, Hospital Veterinário Universitário, Universidade Federal de Santa Maria, 97105-900 Santa Maria, RS, Brazil. E-mail: luciele.sm@gmail.com Para a obtenção do diagnóstico definitivo do osteossarcoma realizam-se exames citopatológico e histopatológico. O material para exame citopatológico é coletado através de punção aspirativa por agulha fina (PAAF), já para a realização do exame histopatológico é necessário uma amostra de tamanho maior, geralmente conseguida através de biópsia incisional. Este trabalho tem como objetivo desenvolver uma técnica de coleta de material em cães com suspeita de osteossarcoma através de PAAF para a realização de exame histopatológico. Foram coletadas duas amostras de 12 cães suspeitos de osteossarcoma por PAAF. O material obtido pela primeira coleta foi utilizado para confirmar o diagnóstico através do exame citopatológico, enquanto que o material oriundo da segunda coleta foi fixado em formol a 10% para a análise histopatológica. Quatro das 12 amostras (33,3%) avaliadas histopatologicamente pela metodologia proposta obtiveram também o diagnóstico de osteossarcoma. Esses resultados apontam para uma possível adequação da técnica de coleta de material por PAAF para exame histopatológico.